產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號：M7427S, M7427M
產(chǎn)品規(guī)格：5 rxns, 50 rxns
儲(chǔ)存條件：2~35℃保存，有效期見外包裝
應(yīng)用范圍：適用于生活污水、醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水中的細(xì)菌、病毒的核酸提取
產(chǎn)品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7427S |
M7427M |
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A.裂解液 |
10 mL |
100 mL |
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B.結(jié)合液 |
10 mL |
100 mL |
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C.磁珠懸液 |
0.1mL |
1 mL |
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D.洗滌液A |
15 mL |
150 mL |
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E.洗滌液B |
7.5 mL（首次使用加入7.5 mL異丙醇） |
75 mL（首次使用加入75 mL異丙醇） |
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F.洗滌液C |
4 mL（首次使用加入16 mL無水乙醇） |
40 mL（首次使用加入160 mL無水乙醇） |
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G.洗脫液 |
0.5 mL |
5 mL |
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H.蛋白酶K |
5 mg |
50 mg |
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I.溶液A |
0.5 mL |
5 mL |
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品使用超順磁性微球可以特異性的吸附核酸，通過洗滌去除蛋白質(zhì)、鹽類等雜質(zhì)，洗脫液解離吸附在磁珠上的核酸，分離純化得到高質(zhì)量核酸。
適用于生活污水、醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水中的細(xì)菌、病毒的核酸提取。本產(chǎn)品既可手動(dòng)提取，也適用于自動(dòng)化核酸提取儀進(jìn)行高通量全自動(dòng)提取。提取的產(chǎn)物可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)。
適用儀器
本試劑盒適用于Thermo KingFisher Flex24等大體積自動(dòng)化核酸提取儀，也適用于手動(dòng)提取。
樣本要求
1.適用于生活污水、醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水、鋁鹽混凝沉淀法富集得到的污水病毒濃縮液上清。
2.污水樣本預(yù)離心：取50 mL的污水樣本在4℃、2500 g條件下離心30 min，留取上清液備用，剩余污水樣本作為備份。
注：當(dāng)污水樣本懸浮物含量過高，可能影響核酸提取和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測時(shí)，應(yīng)采用預(yù)離心棄除懸浮物后再進(jìn)行后續(xù)操
作；提取污水中的細(xì)菌核酸不可預(yù)離心。
實(shí)驗(yàn)步驟
一．首次使用前
1.在洗滌液B中加入瓶身標(biāo)簽指定量的異丙醇（分析純），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻。在洗滌液C中加入瓶身標(biāo)簽指定量的無水乙醇（分析純），并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻。
2.在蛋白酶K中加入瓶身標(biāo)簽指定量的溶液A，并于“□”內(nèi)打上“√”，混勻后保存于-20℃
二．手動(dòng)操作流程（1mL樣本為例，其它樣本體積參考表1）
1.客戶自備物品
（1）異丙醇（分析純）
（2）15 mL離心管、1.5 mL離心管（DNase-free、RNase-free）
（3）單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL、5000 μL
（4）漩渦振蕩器
（5）垂直混勻儀
（6）水浴鍋或金屬浴
（7）磁性分離器：可選用磁性分離器，貨號：M7429
注：每次使用前，試劑盒需平衡至室溫。
2.實(shí)驗(yàn)操作
（1）準(zhǔn)備裂解液：裂解液65℃水浴5~10 min至試劑沉淀完全溶解。
（2）裂解：取15mL離心管加入1 mL污水樣本（或200 μL鋁鹽混凝沉淀法富集得到的污水病毒濃縮液上清與800 μL純化水），然后加入2 mL裂解液，再加入100 μL蛋白酶K（檢查是否已加入溶液A），調(diào)整合適的轉(zhuǎn)速渦旋振蕩1 min，使其充分混合，再將離心管置于65℃加熱10 min，間隔5min渦旋振蕩30s。
（3）結(jié)合：在上述15mL離心管中加入2 mL結(jié)合液，2 mL異丙醇（自備），20 μL磁珠懸液，室溫垂直混勻10min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
（4）洗滌
a.加入0.8 mL洗滌液A，使用移液器吸取管內(nèi)液體吹打管壁磁珠至管底并混勻，把管內(nèi)的磁珠懸液轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，渦旋振蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
b.加入0.8 mL洗滌液B（檢查是否已加入異丙醇），渦旋振蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
c.加入0.8 mL洗滌液C（檢查是否已加入無水乙醇），渦旋振蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并取下離心管。
d.加入0.8 mL洗滌液C，渦旋振蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器移去上清液并保持離心管于磁力架上。
注：步驟d應(yīng)盡量除盡管內(nèi)殘留的液滴。
（5）干燥：保持離心管開蓋置于磁力架上，室溫放置3~10min至表面無明顯液體光澤。
（6）洗脫：加入20~100 μL洗脫液，渦旋振蕩1 min使磁珠充分混勻，于65℃加熱3min后再渦旋振蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的核酸。
表1. 提取1~5 mL樣本量對應(yīng)使用的試劑
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樣本體積 容器與試劑 |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
5 mL |
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離心管類型 |
15 mL離心管 |
50 mL離心管 |
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裂解液 |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
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蛋白酶K |
100 μL |
200 μL |
300 μL |
400 μL |
500 μL |
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結(jié)合液 |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
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異丙醇（自備） |
2 mL |
4 mL |
6 mL |
8 mL |
10 mL |
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磁珠懸液 |
20 μL |
40 μL |
60 μL |
80 μL |
100 μL |
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洗滌液A |
0.8 mL |
0.8 mL |
1 mL |
1 mL |
1 mL |
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洗滌液B |
0.8 mL |
0.8 mL |
1 mL |
1 mL |
1 mL |
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洗滌液C |
0.8+0.8 mL |
0.8+0.8 mL |
1+1 mL |
1+1 mL |
1+1 mL |
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洗脫液 |
20~100 μL |
30~100 μL |
40~100 μL |
50~150 μL |
60~150 μL |
注：本產(chǎn)品的洗脫效率與洗脫液體積有關(guān)，洗脫液體積越大，洗脫的核酸總量越多，但濃度越低。
二、自動(dòng)化操作流程
根據(jù)不同型號自動(dòng)化核酸提取儀而定，詳情請咨詢技術(shù)支持。
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒提前30 min從冰箱取出后平衡至室溫。裂解液試劑瓶提前10 min放入水浴鍋中65℃預(yù)熱溶解后混勻。
2. 檢查耗材并標(biāo)記板號；檢查所有深孔板底是否有損壞或裂縫；檢查磁棒套是否有高低不平或歪斜。檢查完畢后把磁棒套放入深孔板內(nèi)，在磁棒套板的每個(gè)孔上方輕輕均勻按壓使磁棒套復(fù)位。
3. 確認(rèn)儀器狀態(tài)正常及程序正常（用戶可根據(jù)實(shí)際使用情況自行調(diào)整提取程序參數(shù)，如磁吸時(shí)間、干燥時(shí)間、洗脫體積等）。
4.加入試劑與樣本。移液槍插入孔底后把洗脫液加在中間凹陷位置，請勿加在兩側(cè)位置。本產(chǎn)品自動(dòng)操作洗脫體積可低至50 μL，但需注意洗脫效率與洗脫液體積有關(guān)，洗脫液體積越大，洗脫效率越高，洗脫的核酸總量越多，但濃度越低。
說明書：
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