產品概述：
產品貨號：M7424S, M7424M
產品規格：10 rxns, 100 rxns
儲存條件：2~35℃保存，有效期見外包裝
產品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7424S |
M7424M |
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A.磁珠懸液 |
0.2 mL |
2 mL |
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B.緩沖液 |
3 mL |
30 mL |
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C.裂解液 |
2.5 mL |
25 mL |
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D.洗滌液I |
6 mL |
60 mL |
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E.洗脫液 |
2 mL |
20 mL |
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F.蛋白酶K |
0.2 mL |
2 mL |
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G.溶菌酶 |
36 mg |
360 mg |
產品介紹
本產品適用于從細菌培養液等樣本中提取基因組DNA。提取利用超順磁性微球搭配特定的緩沖體系可以特異性結合細菌基因組DNA，通過洗滌去除DNA以外的蛋白質等雜質。洗脫液解離吸附在磁珠上的DNA，分離純化得到高質量核酸。提取的產物可用于各種分子實驗，例如酶切、PCR等。
實驗步驟
一．首次使用前
1.在洗滌液I中緩慢加入指定量（見瓶身標簽）的異丙醇（分析純，需客戶自備），并打上“√”，混勻后2~8℃保存。
2.在溶菌酶干粉中加入指定量（見管身標簽）的緩沖液，并打上“√”，混勻后分裝保存于-20℃，避免反復凍融，建議凍融不超過3次，以免影響其活性。
二．客戶自備物品
1.異丙醇（分析純）
2.80%乙醇
3.1.5 mL離心管：3個/樣品
4.單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL
5.漩渦振蕩器
6.垂直混合儀
7.恒溫金屬浴或水浴鍋（75℃、56℃）
8.磁性分離器：可選用UE磁性分離器（貨號：M7429）
9.RNaseA（50mg/mL）：可根據需要選配
二．操作步驟
1. 樣本處理：取0.5~5 mL細菌培養液（<2×109細菌量），10000 rpm離心1~3min，棄上清。加入200μL緩沖液，振蕩至菌體徹底懸浮。
注意：對于較難破裂的革蘭氏陽性菌，可直接加入110 μL緩沖液和70 μL溶菌酶，37℃處理30 min以上。（檢查溶菌酶是否已加入緩沖液）
如果需要去除RNA，可加入10 μL RNaseA（50 mg/mL）溶液，振蕩混勻，室溫放置10 min。
2. 裂解：向管中加入20μL蛋白酶K和230μL裂解液，以渦旋振蕩器最大轉速漩渦震蕩10 s后，置于75℃條件下反應15 min，每5 min振蕩混勻一次。
3. 結合：加入300μL異丙醇和20μL磁珠懸液，漩渦震蕩10 s后，置于垂直混合儀上反應3 min（或室溫靜置，每1分鐘振蕩混勻一次）。然后將離心管置于磁性分離器上放置2 min，用移液器移去上清液并取下離心管。
注意：此步驟的磁性分離時間應不少于2 min。
4.洗滌
（1）加入600μL洗滌液I（檢查是否已加入異丙醇），以渦旋振蕩器最大轉速漩渦震蕩至少1 min，使磁珠充分重懸，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。
（2）重復該步驟一次。
（3）加入600μL 80%乙醇，以渦旋振蕩器最大轉速漩渦震蕩至少1 min，使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。
（4）重復該步驟一次。
注意：最后一步洗滌應盡量除盡洗滌液。
5. 干燥：保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置5~10 min后，即磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。
注意：干燥過程中若發現反應管中有液體殘留時，可用小量程移液器吸棄液體。
6. 洗脫
（1）加入100~200μL洗脫液，渦旋震蕩，或用移液器緩慢吹打磁珠，使磁珠充分重懸。然后于56℃條件下孵育6 min。
（2）將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的基因組DNA，可進行后續實驗或保存于-20℃。
注意事項
1.操作之前，請務必認真閱讀本產品手冊。
2.樣品的質量對產物DNA的純化量有較大影響，應避免反復凍融樣品。
3.長期保存時，建議將蛋白酶K、溶菌酶保存在-20℃，磁珠懸液保存在2~8℃。
4.應避免對磁珠進行冷凍、離心等操作。
5.磁珠取用前應充分重懸均勻。
6.磁珠干燥前，應使用移液器吸盡洗滌液。
7.應避免磁珠過度干燥，否則會嚴重降低核酸洗脫效率。
8.建議使用質量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。
說明書：
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