3. 1.5 mL離心管：2個(gè)/樣品

4.單通道移液器：20 μL、200 μL、1000 μL

5.漩渦振蕩器

6.垂直混合儀

7.恒溫金屬浴或水浴鍋（55℃）

8.磁性分離器：可選用UE磁性分離器（貨號(hào)：M7429）

三．操作步驟

1.樣本前處理

（1）針對(duì)動(dòng)、植物組織樣本：在樣本中加入適量PBS或生理鹽水，研磨充分，12000 g離心5~10 min，取300 μL上清作為提取樣本。

（2）針對(duì)糞便樣本：在樣本中加入適量PBS或生理鹽水，混勻后12000 g離心5~10 min，取300 μL上清作為提取樣本。

2.手動(dòng)操作流程

（1）裂解：取一個(gè)1.5 mL離心管，加入300μL的樣品，再分別加入20 μL的蛋白酶K和550μL的裂解液，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩1 min后，置于60℃條件下反應(yīng)5 min。

（2）結(jié)合：加入20μL的磁珠懸液，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩1 min后，置于60℃條件下反應(yīng)5 min。然后將離心管置于磁性分離器上放置2 min，用移液器移去上清液并取下離心管。

（3）洗滌并干燥

a. 加入600μL洗滌液I，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩2 min，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。

b. 加入600μL洗滌液I，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩1 min，再將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并取下離心管。

c. 加入600μL 80%乙醇，以渦旋振蕩器最大轉(zhuǎn)速漩渦震蕩1 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，移去上清液并保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置2 min后，至磁珠表面無明顯光澤，取下離心管。

注意：干燥過程中若發(fā)現(xiàn)反應(yīng)管中有液體殘留時(shí)，可用小量程移液器吸棄液體。

（4）洗脫：加入50~100 μL洗脫液，渦旋震蕩2 min或用移液器緩慢吹打磁珠，使磁珠充分重懸。然后于60℃下加熱3 min，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉(zhuǎn)移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化得到的核酸，可保存于-20℃。

注意事項(xiàng)

1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品手冊(cè)。

2. 應(yīng)避免對(duì)磁珠進(jìn)行冷凍、離心等操作。

3. 磁珠取用前應(yīng)充分重懸均勻。

4. 磁珠干燥前，應(yīng)使用移液器吸盡洗滌液。

5. 應(yīng)避免磁珠過度干燥，否則會(huì)嚴(yán)重降低核酸洗脫效率。

6. 建議使用質(zhì)量較好的離心管和移液器吸頭，避免因粘附磁珠而造成損失。

7. 使用前請(qǐng)檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請(qǐng)將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。