產品概述：
產品貨號：M7417S, M7417M
產品規格：20 rxns, 100 rxns
儲存條件：2~8℃保存，可在常溫下短時間儲存，有效期見外包裝
應用范圍：用于核酸的提取、富集、純化等步驟
產品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7417S |
M7417M |
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A.磁珠懸液 |
4 mL |
20 mL |
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B.裂解液 |
20 mL |
100 mL |
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C.洗滌液I |
60 mL |
150 mL×2 |
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D.洗滌液II |
12 mL（首次使用前每瓶內加入48 mL乙醇） |
30 mL×2（首次使用前每瓶內加入120 mL乙醇） |
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E.洗脫液 |
3 mL |
15 mL |
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F.蛋白酶K |
10 mg（首次使用前加入1 mL溶液A） |
50 mg（首次使用前加入5 mL溶液A） |
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G.溶液A |
1 mL |
5 mL |
產品介紹
含有靶核酸的待分離樣品經裂解后，利用磁珠與DNA分子特異性識別和高效結合，并利用磁性分離器或磁棒使磁珠吸附于管壁或磁棒套，通過洗滌、洗脫、純化過程得到所需的DNA。
適用儀器
本試劑盒適用于Thermo KingFisher Flex24等大體積自動化核酸提取儀，也適用于手動提取。
樣本要求
新鮮或冷凍的血漿、血清、尿液或無細胞體液。樣本處理示例：
1.血漿樣本：取含有抗凝劑或游離DNA保存液的采血管中的血液放入冷凍離心機內設置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上層上清即為血漿，吸取時槍頭盡量遠離中間的細胞層，防止吸入細胞。取出上清后對上清再次進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min后取上清，以去除細胞碎片等雜質。
如血漿經冷凍再次融化，需進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min取上清，以去除凍融產生的析出物。
2.血清樣本：離體的血液室溫30 min凝固之后，放入冷凍離心機內設置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上清即為血清。
3. 尿液樣本：取新鮮尿液樣本放入冷凍離心機內設置4℃，3800 rpm（約2000 g）離心10 min。使用移液槍緩慢吸取上清，吸取時槍頭盡量遠離底部的細胞層。取出上清后對上清再次進行4℃，10000 rpm（約16000 g）離心10 min后取上清去除細胞碎片等雜質。
實驗步驟
一．首次使用前：
1.在蛋白酶K干粉中加入指定量（見瓶身標簽）的溶液A，并于“□”內打上“√”，混勻后需保存于-20℃。
2.在洗滌液II中加入指定量（見瓶身標簽）的無水乙醇（需客戶自備），并于“□”內打上“√”，混勻。
二．手動操作流程
1.客戶自備物品
（1）1.5 mL離心管、15 mL離心管、50 mL離心管（僅適用于4 mL樣本體積）
（2）單通道移液器：200 μL、1000 μL 、5 mL
（3）渦旋震蕩器
（4）恒溫金屬浴或水浴鍋（60℃）
（5）2/15 mL磁性分離器、50 mL磁性分離器
（6）異丙醇
（7）無水乙醇
2. 操作步驟
注意：不同樣本體積及其它試劑加樣量請參照表1要求！
（1）裂解：取一個15 mL離心管（4 mL樣本體積可使用50 mL離心管，如用15 mL離心管導致無法渦旋混勻可用上下翻轉15 mL離心管20次替代渦旋混勻操作），加入表1對應體積的蛋白酶K，再依次加入表1對應體積的樣本和裂解液，最大轉速渦旋震蕩混合均勻30 s 后，將15 mL離心管置于恒溫金屬?。ɑ蛩″仯?0℃加熱20 min（每隔10 min渦旋震蕩30 s）。
（2）結合：向上述15 mL離心管中加入表1對應體積的異丙醇和磁珠懸液，最大轉速渦旋震蕩混勻30 s 后，將15 mL離心管置于恒溫金屬?。ɑ蛩″仯?0℃加熱10 min（每隔5 min渦旋震蕩30 s），然后將15 mL離心管置于磁性分離器上至溶液澄清，用移液器吸棄上清液，取下15 mL離心管。
（3）洗滌：
注意：洗滌步驟b-d的磁吸過程中，溶液磁吸澄清后需同步上下翻轉磁性分離器和離心管使管蓋的磁珠吸附至管壁，減少磁珠損失。
a. 用移液器吸取1 mL洗滌液I反復吹打上述15 mL離心管中的磁珠20次，使磁珠充分重懸，用移液器吸取這1 mL磁珠懸液轉移至新的1.5 mL離心管中，將1.5 mL離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液后取下1.5 mL離心管。
b.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅰ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，取下離心管。
c.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅱ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，取下離心管。
d.在上述1.5 mL離心管中加入1 mL洗滌液Ⅱ，渦旋震蕩1 min使磁珠充分重懸，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，用移液器吸棄上清液及管蓋液滴，保持離心管于磁性分離器上靜置1 min后用小量程的移液器吸棄管底及管壁的殘留液滴。
（4）干燥：保持離心管于磁性分離器上，于室溫下靜置5-10 min至磁珠表面無明顯的液體光澤，取下離心管。
（5）洗脫：在上述1.5 mL離心管中加入表1對應體積的60℃預熱的洗脫液，渦旋震蕩1 min或用移液器吹打磁珠50次，使管壁的磁珠充分重懸，于恒溫金屬浴（或水浴鍋）60℃加熱3-5 min后，將離心管置于磁性分離器上直至溶液澄清，轉移上清液至新的1.5 mL離心管中，此即為純化后的游離DNA。
注意：本產品手動操作洗脫體積可低至20 μL，但需注意洗脫效率與洗脫液體積有關，洗脫液體積越大，洗脫效率越高，洗脫核酸總量越多。
表1.手動操作不同樣本體積及其它試劑加樣量
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樣本體積 加入試劑 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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蛋白酶K |
30 μL |
50 μL |
100 μL |
150 μL |
200 μL |
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樣本 |
600 μL |
1mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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裂解液 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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異丙醇 |
600 μL |
1 mL |
2 mL |
3 mL |
4 mL |
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磁珠懸液 |
120 μL |
200 μL |
400 μL |
600 μL |
800 μL |
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洗脫液 |
20~50 μL |
20~50 μL |
50~100 μL |
50~150 μL |
50~150 μL |
三．自動化操作流程
可以適配市面上大部分品牌核酸提取儀，詳細參數請聯系我司技術支持或設備廠商技術支持。
注意事項
1. 操作之前，請務必認真閱讀本產品手冊。
2. 提取效果與樣本質量有關，應避免對樣本進行反復凍融。如凍融后樣本中有析出物，應高速離心去除析出物。
3. 應避免對磁珠進行冷凍或過度干燥，否則會嚴重降低提取效率。
4. 磁珠每次取用前應充分重懸均勻。
5. 使用前請檢查各組分是否存在析出情況，如有析出，請將試劑瓶置于60℃水浴加熱溶解后使用。本說明書提供3種樣本處理方法。
說明書：
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