3. 抗體吸附：在步驟2預處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃）置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉約15 min后進行磁性分離，移棄上清液。

4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL結合洗滌液，振蕩重懸磁珠后進行磁性分離，移棄上清液；該操作重復3次。

5. 抗體洗脫：在上述完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5~1.0 mL洗脫液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（約25℃）置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，翻轉10 min后進行磁性分離，收集上清液至新的EP管。

注意事項：該步驟洗脫液用量，建議客戶使最終洗脫的抗體濃度控制在0.6~1.2 mg/mL，此時第1次洗脫條件中95%以上的抗體將被洗脫下來；若洗脫液 用量過少，會導致部分抗體在第1次洗脫時仍然留在磁珠上，從而導致抗體回收率降低。

6. 抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的中和液，一般為抗體洗脫體積的1/10，最終使洗脫的抗體pH值保持中性環境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用洗脫液洗滌2次，磁性分離，棄上清液；接著用結合洗滌液洗滌3次，磁性分離，棄上清液，加入200 μL保存液重懸磁珠，置于2~8℃保存。

8. 磁珠再生

（1）磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續使用5次后進行磁珠再生處理。

（2）按約每1 mL 10%（V/V）磁珠加入1 mL 1%（V/V）Triron X-100磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉混合，10 min后進行磁性分離，棄上清液。

（3）立即加入1 mL結合洗滌液 進行重懸，然后磁性分離，棄上清液，重復該操作3次。

（4）加入1 mL保存液 重懸磁珠，置于2~8℃保存。

注意事項

1.進行抗體純化操作之前，請務必認真閱讀本操作說明書。

2.本產品須與磁性分離器配套使用。

3.磁珠使用前應充分振蕩均勻。

4.磁珠應保存在儲存溶液中，防止干燥。

5.請勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。

附表1. Protein A與不同來源及類型的抗體親和性比較

注: “+”=結合能力弱，“+++”=結合能力中等，“+++++”=結合能力強，“-”=無法結合