產品概述：
產品貨號：M7403S，M7403M
產品規格：for 1×108 cells , for 5×108 cells
儲存條件：2~8℃保存，不可冷凍，有效期見外包裝
應用范圍：分選小鼠脾臟和淋巴結CD3+ T細胞
產品組分
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組分 |
組分含量 |
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M7403S |
M7403M |
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A. Biotin-Antibody Mix |
20 μL |
100 μL |
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B. Streptavidin Beads |
0.2 mL |
1 mL |
產品介紹
本品是通過陰性分選法從小鼠脾臟細胞或其它組織的單細胞懸液中分離出CD3+ T細胞。原理是選用不同的生物素（biotin）標記單克隆抗體對非目標細胞（非CD3+ T細胞）進行標記，而后通過鏈霉親和素（streptavidin）標記的磁珠對非目標細胞進行清除，從而達到小鼠CD3+ T細胞分選的目的。分選過程需要用到磁力分離器。
實驗步驟
以分選小鼠脾臟CD3+ T細胞為例：
1. 制備單細胞懸液：在70 μm細胞篩網上研磨脾臟，以預冷的PBS沖洗細胞篩網，收集細胞懸液于50 mL離心管中，500 g，離心5 min。
2. 離心結束，棄上清，加入5 mL紅細胞裂解液（ACK），室溫裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g，離心5 min。
注意：紅細胞裂解步驟可根據所用裂解液不同調整用量及時間。少量紅細胞殘留不會影響后續分選及細胞純度。
3. 離心完成后，棄上清，將脾細胞重懸于PBS，細胞懸液用70 μm細胞篩網過濾后，計數。計數完成后，500 g，離心5 min。
注意：細胞懸液需要過細胞篩網，以除去組織和細胞團塊，否則會影響后續細胞分選純度。
4. 離心完成后，棄上清，將細胞重懸于分選buffer中，調整細胞密度為1×108 cells/mL。
注意：分選buffer為含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需預先通過0.22 μm濾膜過濾除菌。
5. 將100 μL細胞懸液（1×107個細胞）加入無菌流式管底部，再加入2 μL Biotin-Antibody Mix，混勻后4°C孵育10 min。
注意：加入細胞懸液時將細胞加入流式管底部，避免沿流式管管壁加入。根據所使用磁力架不同也可使用離心管進行細胞分選。如果分選更多細胞，則按比例增加Biotin-Antibody Mix的用量。
6. 孵育完成后，在流式管中加入20 μL清洗過的Streptavidin Beads（磁珠使用前需要用分選buffer進行清洗：渦旋振蕩重懸磁
珠，吸取實驗需要的磁珠至1.5 mL離心管，加入1 mL分選buffer，10000 g離心1 min，棄上清。加入1 mL分選buffer重復洗滌磁珠1次后用與原來相同體積的分選buffer重懸磁珠。如吸取20 μL磁珠進行清洗，則清洗后用20 μL分選buffer進行重懸），混勻后4°C孵育10 min。
注意：如果分選更多細胞，則按比例增加Streptavidin Beads用量。例如分選5×107個細胞，在500 μL細胞懸液中加入10 μL Biotin-Antibody Mix和100 μL Streptavidin Beads。如果分選少于1×107個細胞，則將細胞懸液體積補至100 μL，加入2 μL Biotin-Antibody Mix和20 μL Streptavidin Beads。
7. 孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL分選buffer，用移液器上下混合吹打5次混勻（避免劇烈振蕩或者上下顛倒混勻）。
8. 將含有細胞的分選流式管置于磁力架上，靜置5 min。
9. 將細胞懸液輕柔倒入一個無菌離心管中（傾倒過程中流式管不要脫離磁力架），此細胞懸液中即包含純化的小鼠CD3+ T細胞，500 g，離心5 min。離心后棄上清，收集細胞。
10. 根據實驗需要洗滌細胞后，將細胞重懸于所需緩沖液或培養基中，即可用于后續分子生物學或細胞生物學實驗。
圖1. 本產品分選效果圖
從C57BL/6小鼠脾臟細胞中分選CD3+ T細胞，分選前后的細胞用FITC anti-mouse CD3抗體（克隆號145-2C11）標記后進行流式細胞儀分析，分選前后的CD3+ T細胞純度分別為35.3%和97.6%。
注意事項
1. 磁珠和抗體混合液使用和保存過程中均應避免冷凍、高速離心等操作；
2. 建議選用低吸附移液器吸頭和離心管，避免因吸附造成磁珠和抗體的損耗；
3. 本產品需與磁性分離器配套使用；
4. 本產品僅供研究使用。
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