產品概述:
儲存條件
Buffer PCR-A:DNA結合溶液。室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate:去鹽液。使用前,按試劑瓶上的指定體積加入無水乙醇(可用100%乙醇或95%無水乙醇),混合均勻,室溫密閉貯存。
Eluent: 洗脫液,室溫密閉貯存。

流程圖

常見問題解答:
◆得率低或者得不到DNA
·Buffer W2中沒有加入乙醇
Buffer W2在使用之前必需加入100%或者95%的乙醇。
·不合適的洗脫液
DNA只能在低鹽和pH7.0的條件下有效的洗脫。應使用試劑盒提供的洗脫液或者用水(pH7.0)洗脫。在65℃下預熱洗脫液可以提高洗脫效率。
·洗脫液體積不夠或者沒有浸潤膜
洗脫液應加在制備膜的中央以確保其均勻的浸潤整個膜。
·采用不合適的負壓裝置
確保負壓保持在 -25至-30英尺汞柱。
◆DNA不能很好地用于下游實驗
·洗脫時鹽濃度過高
確保在洗脫之前鹽分都被洗滌去除。正確使用Buffer W1,避免在管體上殘留。
·樣品上樣電泳時樣品跑出膠孔
洗脫液中殘留有乙醇(樣品會飄在瓊脂糖凝膠孔中)
仔細的操作說明書中的所有步驟以去除殘留的乙醇。
·洗脫液中含有引物二聚體
引物二聚體會影響后續的反應,如測序。任何大于40bp的引物二聚體都將不會被完全去除。結合完后,用750ul鹽酸胍(35g鹽酸胍溶于100ml去離子水)洗滌UE PCR清潔制備管或者制備板,然后再接著進行說明書中所述的洗滌洗脫步驟。
·洗脫液中含有變性的單鏈DNA,這在凝膠電泳中可見一條又小又淡又糊的條帶
洗脫后,將洗脫液在95℃中溫浴2min。在使用前冷卻至室溫。95℃溫浴2min后也可以在洗脫液中加入10 mM NaCl以促進復性。