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  • UE細菌基因組DNA小量制備試劑盒

    產(chǎn)品貨號: UE-MN-BT-GDNA-50/UE-MN-BT-GDNA-250

    產(chǎn)品規(guī)格: 50T/250T

    目錄價(元):685/3081

    大包裝詢價


產(chǎn)品概述:

儲存條件
RNase A: 50 mg/ml, 室溫貯存6個月;長期貯存于-20℃。
溶菌酶:50%甘油溶解溶菌酶,使溶菌酶濃度為50 mg/ml,-20密閉貯存。
Buffer S: 細菌原生質(zhì)制備液,加入RNase A后,4密閉貯存。
0.25M EDTA: 室溫密閉貯存。
Buffer G-A: 裂解液,室溫密閉貯存。
Buffer G-B: 蛋白去除液,室溫密閉貯存。
Buffer DV-A: Buffer DV的制備液(請參照實驗準備Buffer DV的配制方法配制),室溫密閉貯存。
Buffer DV: 相分離液,室溫密閉貯存。
Buffer BV: DNA結(jié)合液,室溫密閉貯存。
Buffer W1: 洗滌液,室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液。使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇)并混合均勻,室溫密閉貯存。
Eluent: 2.5 mM Tris-HCI, pH 8.5,室溫密閉貯存。



流程圖



常見問題解答:


洗脫產(chǎn)物的DNA量很少或沒有
·樣品量過多,使試劑處理能力不夠。
·裂解不充分 
溶菌酶失活(-20℃可放6個月)
溶菌酶作用時間不夠
·吸取下相時有上相的物質(zhì)污染
·buffer W2中未加無水乙醇或者使用了低濃度的乙醇代替了無水乙醇。 
·DNA洗脫效率不高
最后一次buffer W2洗滌完后不要將制備管放于負壓裝置上抽的過干。

A260/280比值過低
·樣品量過多
·細菌裂解不完全
·吸取下相時有中相層物質(zhì)污染

RNA污染 (A260/280比值偏高)
·未將RNase A加入到buffer S中
·RNase A失活或者酶量不夠

基因組DNA有降解
完全降解的基因組DNA在凝膠電泳上會出現(xiàn)模糊的條帶或者是拖尾現(xiàn)象。
·菌液不新鮮,細胞凋亡導致DNA降解
·操作過于劇烈導致DNA被機械打斷
·未能有效抑制內(nèi)源核酸酶作用
溶菌酶裂解時間過長,沒有及時加入EDTA并且低溫操作。

基因組DNA酶反應效果不佳
·DNA純度低
樣品過多導致裂解不充分,從而引起大量蛋白、多糖、脂類等雜質(zhì)殘留,影響后續(xù)酶切反應效果。可適當減少樣品初始量。
·鹽分污染:可以用2× Buffer W2進行洗滌
·乙醇污染:在最后一次Buffer W2洗滌后可將制備管由原來離心1min 增加至離心2min

濾器或者制備管堵孔
·樣品過多
·裂解不充分 

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