產(chǎn)品概述:
儲(chǔ)存條件
Buffer RL: 紅細(xì)胞裂解液。室溫密閉貯存。
Buffer R-Ⅰ: 細(xì)胞裂解液。室溫密閉貯存。
Buffer R-Ⅱ: 中和液。室溫密閉貯存。
Buffer W1A concentrate: 洗滌液。使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇(可用無水乙醇或95%乙醇),混合均勻,室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液。使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇(可用無水乙醇或95%乙醇), 混合均勻,室溫密閉貯存。
Buffer TE(DNase & RNase-free): 洗脫液。10 mM Tris-HCL 0.1 mM EDTA, pH 7.5。室溫密閉貯存。

流程圖

常見問題解答:
◆紅細(xì)胞沒有完全裂解
·第2步中,冰浴后混濁的懸液沒有變澄清
適當(dāng)延長冰上孵育時(shí)間至20min。
·在第3步時(shí),離心沉淀仍然是紅色的
在第4步時(shí)加入Buffer RL后再增加冰上孵育時(shí)間5-10min。
◆RNA提取得率低
·組織用血量太少或者太多
起始血量過少,則RNA含量較低;起始血量過多則可能超過裂解液的裂解能力,裂解將不完全,從而導(dǎo)致RNA得率低。
·取樣為上清液時(shí),盡量吸盡上清(如細(xì)胞培養(yǎng)上清)。
·洗脫液溫度過低
可以將洗脫液在65℃預(yù)熱后使用。
◆OD260/OD280比值偏低
·蛋白質(zhì)污染
在加入Buffer R-II中和離心后避免將沉淀物轉(zhuǎn)移到RNA結(jié)合膜上。
·用水稀釋樣品
RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測定,低離子強(qiáng)度或低pH值會(huì)使OD280值升高。
·確認(rèn)Buffer W1A和Buffer W2加入的乙醇是否是100%無水乙醇/95%乙醇,加入體積是否正確。
◆RNA降解
·蛋白質(zhì)污染
在加入Buffer R-II中和離心后避免將沉淀物轉(zhuǎn)移到RNA結(jié)合膜上。
·用水稀釋樣品
RNA應(yīng)使用TE Buffer稀釋后再進(jìn)行吸光度值的測定,低離子強(qiáng)度或低pH值會(huì)使OD280值升高。
·確認(rèn)Buffer W1A和Buffer W2加入的乙醇是否是100%無水乙醇/95%乙醇,加入體積是否正確。
◆基因組DNA污染
·血樣用量過多
血樣用量超出了裂解液Buffer R-I的處理范圍。請選擇合適的樣本處理量。
·樣品中含有有機(jī)溶劑(如乙醇、DMSO等)。避免這些會(huì)引起裂解液性質(zhì)改變的物質(zhì)。
·加入Buffer R-II離心后,取上清時(shí)避免吸入沉淀。