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  • UE總RNA中量制備試劑盒

    產品貨號: UE-MD-MS-RNA-10/UE-MD-MS-RNA-25

    產品規格: 10T/25T

    目錄價(元):915/1995

    大包裝詢價


產品概述:

儲存條件
Midiprep RNA column: 中量制備管。室溫密閉貯存。
Lysate Filtration column: 過濾柱,用于DNA和蛋白質的去除。室溫密閉貯存。
Buffer R-I : 細胞裂解液。 室溫密閉貯存。
Buffer R-II : 中和液。 室溫密閉貯存。
Buffer W1A concentrate: 洗滌液。使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇)。混合均勻,室溫密閉貯存。
Buffer W2 concentrate: 去鹽液。使用前,按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇(可用100%乙醇或95%乙醇)。混合均勻,室溫密閉貯存。
Buffer TE (nuclease-free): 洗脫液。10 mM Tris-Cl, 0.1 mM EDTA, pH 7.5。室溫密閉貯存。



流程圖





常見問題解答:


RNA提取得率低
·該組織或者細胞中RNA含量偏低
不同細胞和組織中RNA的豐度不同,如肝臟,胰腺,心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4 μg/mg),腦,胚胎,腎臟,肺,胸腺,卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2 μg/mg),膀胱,骨,脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05 μg/mg)。
·組織起始量太少或者太多
樣品量過少,則細胞組織中RNA含量較低;樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力,裂解將不完全,從而導致RNA得率低。
·取樣為上清液時,盡量吸盡上清(如細胞培養上清)。
·洗脫液溫度過低
可以將洗脫液在65℃預熱后使用。

OD260/OD280比值偏低
·蛋白質污染
在加入R-II中和離心后避免將沉淀物轉移到RNA結合膜上。
·用水稀釋樣品
RNA應使用TE Buffer稀釋后再進行吸光度值的測定,低離子強度或低pH值溶液會使OD280值升高。
·多糖或多酚的殘留
一些特殊的組織和植物中,多糖、多酚含量較多,這些殘留也會導
致OD260/OD280比值偏低。因此,從這類材料中提取RNA時,需要注意多糖、多酚雜質的去除。
·確定Buffer W1A和Buffer W2中加入的乙醇是否是100%無水乙醇/95%乙醇,加入體積是否正確。

RNA降解
·材料保存不當
使用的組織材料不夠新鮮。提取RNA的組織材料應采用新鮮的組織材料,或將新鮮的組織材料用液氮迅速冷凍后置于-80℃保存。絕不能未經液氮速凍而直接保存于-80℃冰箱中。
·裂解液用量不足
如果試劑沒有問題,且外源性污染也可以排除,那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養皿中裂解樣品,一定要使裂解液完全浸沒樣品。
·特殊材料
某些富含內源核酸酶的樣品(如肝臟,胸腺等),即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是:在液氮條件下將組織研碎,并且勻漿時使用更多裂解液。
·外源RNA酶的污染
試劑,器械及實驗環境中的RNA酶進入實驗系統。
·內源RNA酶的污染
實驗樣品過多;勻漿時溫度過高。

基因組DNA污染
·樣品用量過多
樣品用量超出了裂解液Buffer R-I的處理范圍。請選擇合適的樣本處理量。
·樣品中含有有機溶劑(如乙醇、DMSO等)
避免這些會引起裂解液性質改變的物質。
·加入Buffer R-II離心后,取上清時避免吸入沉淀。

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