適用于一般細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞，部分干細(xì)胞等。

◆如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
血清解凍時(shí)應(yīng)將血清從-15~-70℃的低溫冰箱中取出放入4℃冰箱解凍1天，待全部解凍后再分裝。解凍過程中請(qǐng)不時(shí)搖勻（小心勿造成氣泡），使血清成分和溫度均勻，從而減少沉淀的產(chǎn)生。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍，并避免反復(fù)凍融。需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)被破壞，而影響血清質(zhì)量。

◆有時(shí)在血清中見到的絮狀沉淀可能是些什么物質(zhì)？
主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量，可用400 xg離心5 min去除，也可不用處理。

◆如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
(1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。
(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì)變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。
(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
(6) 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。

◆在使用前是否需要對(duì)血清進(jìn)行過濾？
一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

◆自然溶化好的胎牛血清放在室溫下一晚還能用嗎？
室溫不可以，建議4℃保存。

◆加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？
不是必須的，看做什么實(shí)驗(yàn)。如果用于培養(yǎng)普通細(xì)胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長(zhǎng)因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補(bǔ)體受體的細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。

◆熱滅活對(duì)血清的作用是什么？
熱滅活步驟能夠滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。補(bǔ)體會(huì)參與以下事件中：溶解細(xì)胞事件，平滑肌收縮，肥大細(xì)胞與血小板釋放組胺，吞噬作用增強(qiáng)，趨化作用，淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的活化等。

◆細(xì)胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過老，破碎的細(xì)胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格?？蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);
(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

◆細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過老。

Bin Gao , Xiaoyu Wang , Meiyu Wang , Wen Liu , Ying Li , Shihai Xia , Wencheng Zhang , Yakai Feng
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