產(chǎn)品概述：
細(xì)胞增殖檢測是評估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實驗手段。檢測細(xì)胞增殖最精確的方法是BrdU法，EdU法檢測試劑盒是BrdU法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）是一種嘧啶類似物，在DNA合成期整合入DNA雙鏈，檢測基于“點擊”反應(yīng)，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴作用發(fā)生共價反應(yīng)形成共價鍵。點擊法的EdU標(biāo)記增殖快速有效、易于使用，只需多聚甲醛固定和Triton X-100促滲就可以使檢測試劑進(jìn)入細(xì)胞，只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的EdU；BrdU方法需要DNA變性（如酸變性、熱變性或者用DNase消化）暴露出BrdU，從而方便BrdU抗體結(jié)合。本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組分，可以用于體外培養(yǎng)細(xì)胞的增殖檢測。
應(yīng)用范圍
細(xì)胞增殖、分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)、病毒復(fù)制等方面的研究
產(chǎn)品信息
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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C6043S |
YF 488 Click-iT EdU通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒（綠色熒光） |
2-20 T |
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C6043M |
10-100 T |
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C6043L |
50-500 T |
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C6044S |
YF 555 Click-iT EdU通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒（橙紅色熒光） |
2-20 T |
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C6044M |
10-100 T |
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C6044L |
50-500 T |
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C6045S |
YF 594 Click-iT EdU通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒（紅色熒光） |
2-20 T |
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C6045M |
10-100 T |
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C6045L |
50-500 T |
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C6046S |
YF 647A Click-iT EdU通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒（遠(yuǎn)紅熒光） |
2-20 T |
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C6046M |
10-100 T |
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C6046L |
50-500 T |
儲運條件
-20℃避光保存，有效期見外包裝；開封后，保存溫度詳見說明書。冰袋運輸。
產(chǎn)品特點
簡單高效：無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法簡單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘；
靈敏度高：無需抗體，檢測染料僅BrdU抗體的1/500，很容易擴(kuò)散，即便是單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測；
快速省時：無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期僅需5小時。
產(chǎn)品組分
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組分 |
2~20
T |
10~100
T |
50~500
T |
開封后保存溫度 |
穩(wěn)定性 |
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A. 10 mM EdU |
40 μL |
200 μL |
1 mL |
-20℃ |
開封后不同組分按指定溫度保存，如后續(xù)保存-20℃也可。 |
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B. YF 488/555/594/647A Azide |
10 μL |
50 μL |
250 μL |
-20℃，避光 |
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C. 10×Click-iT
EdU反應(yīng)緩沖液 |
200 μL |
1 mL |
5 mL |
2~8℃ |
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D. CuSO4 |
100 μL |
500 μL |
2×1.25 mL |
2~8℃ |
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E. Click-iT EdU緩沖液添加物 |
6 mg |
30 mg |
150 mg |
2~8℃ |
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F. Hoechst 33342 |
5 μL |
25 μL |
125 μL |
2~8℃ |
規(guī)格：如果用于熒光顯微鏡檢測，所能使用次數(shù)為上述各個規(guī)格的最大使用次數(shù)（針對96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞），如C6043S可檢測20個孔的樣品（不同容器的具體用量可參考表2）；如果用于流式檢測，所能使用次數(shù)為上述各個規(guī)格的最小使用次數(shù)，如C6043S可檢測2個樣品。
熒光光譜數(shù)據(jù)：YF 488 Azide：495/519 nm；YF 555 Azide：555/565 nm；YF 594 Azide：590/617 nm；YF 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm (bound to DNA)
注意事項
1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實驗。
2. 熒光染料均存在淬滅問題，實驗操作時請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3. Click-iT EdU緩沖液添加物溶液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，以保證最佳結(jié)果。
4. 可設(shè)置未進(jìn)行EdU處理的細(xì)胞經(jīng)YF Dye Azide染色作為陰性對照樣品，用于確定合適的檢測條件，此設(shè)置對干流式細(xì)胞術(shù)檢測尤為重要，可以明確陰性信號的強(qiáng)度以劃分陰性信號跟陽性信號的界限。
5. 本品不建議與TUNEL試劑盒同時檢測。這是由于EdU的結(jié)構(gòu)中有-OH存在，會影響TUNEL的反應(yīng)過程。
6. 本產(chǎn)品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題解答：
◆YF?488/555/594/647有什么區(qū)別？
主要就是檢測EDU的物質(zhì)帶的熒光基團(tuán)不同，檢測時發(fā)射熒光的顏色不同。實驗效果相同，可根據(jù)偏好或需求進(jìn)行選擇。
◆EdU試劑盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？
清洗步驟中，BSA可以終止掉未反應(yīng)的甲醛。
◆能否在活細(xì)胞中進(jìn)行Click-iT EdU檢測？
不可以。雖然EdU是對活細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記，但是疊氮化物檢測試劑和緩沖液組分是細(xì)胞非透過型，檢測信號時的Click反應(yīng)必須在固定和通透的樣品上進(jìn)行。
◆質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表達(dá)的熒光蛋白檢測與Click反應(yīng)兼容嗎？檢測順序是什么？
本產(chǎn)品會影響GFP、RFP、mCherry等熒光蛋白的熒光，故染色后無法直接檢測GFP，建議使用GFP抗體間接檢測。
◆觀測到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？
疊氮化物和炔烴類間Click反應(yīng)非常有選擇性，生物體內(nèi)幾乎不可能有副反應(yīng)發(fā)生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA洗滌的次數(shù)。同時，也可在同樣的檢測條件下設(shè)置一組同等處理的無染料或無Click反應(yīng)對照，以排除自發(fā)熒光干擾。此外，您還可在無EdU 體系中進(jìn)行完整的Click反應(yīng)，驗證Click反應(yīng)信號的特異性。
◆為什么標(biāo)記樣品無信號或特異性信號非常低？如何提高信號？
1.請保證試劑使用時為無色的狀態(tài)，不要使用已經(jīng)變黃的添加劑或緩沖液；
2.為確保Click反應(yīng)試劑能夠到達(dá)核內(nèi)，細(xì)胞需要充分地固定和通透；
3.由于銅離子能結(jié)合到部分試劑上，這會導(dǎo)致催化Click反應(yīng)的有效濃度降低。所以在Click反應(yīng)前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對某些含有這些物質(zhì)的實驗樣品來說，進(jìn)行Click反應(yīng)前，可能需要增加額外的洗滌步驟；
4.當(dāng)銅離子在合適的化合價時，Click反應(yīng)才有效。Click反應(yīng)中用到的銅離子為一價銅(Cu+)。
5.延長Click反應(yīng)的時間至超過30分鐘也并不會提高信號。建議使用新鮮的Click反應(yīng)試劑再次進(jìn)行30分鐘的孵育，可更有效地提高標(biāo)記效率。
◆如何對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染？
試劑盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反應(yīng)后用于細(xì)胞核的染色，也可選擇使用DAPI。
◆可以用于檢測植物細(xì)胞核內(nèi)的DNA復(fù)制嗎?
可以。EdU是小分子，可以穿透植物細(xì)胞的細(xì)胞壁。
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