產(chǎn)品概述：
產(chǎn)品貨號(hào)：
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產(chǎn)品貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
Ex/Em (nm) |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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T6013S |
YF®488 TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒 （綠色，通用型） |
490/515 |
20 T |
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T6013L |
50 T |
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T6039S |
YF®555 TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒 （橙紅色，通用型） |
555/565 |
20 T |
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T6039L |
50 T |
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T6014S |
YF®594 TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒 （紅色，通用型） |
590/617 |
20 T |
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T6014L |
50 T |
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T6063S |
YF®640 TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒 （遠(yuǎn)紅，通用型） |
642/662 |
20 T |
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T6063L |
50 T |
產(chǎn)品規(guī)格：
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規(guī)格 組分 |
20 T |
50 T |
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A. YF®488/555/594/640 TUNEL Reaction Buffer |
1 mL |
2 × 1.25 mL |
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B. TdT Enzyme |
40 μL |
100 μL |
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C. Proteinase K (2 mg/mL) |
40 μL |
100 μL |
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D. DNase I (2 U/μL) |
5 μL |
13 μL |
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E. 10 × DNase I Buffer |
100 μL |
260 μL |
儲(chǔ)存條件：-20℃保存，組分A需避光，避免反復(fù)凍融。有效期見外包裝。冰袋運(yùn)輸。
應(yīng)用范圍：細(xì)胞凋亡檢測。
產(chǎn)品介紹
細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí), 會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA，產(chǎn)生180 bp-200 bp的 DNA 片段，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)的特異的梯狀Ladder圖譜。基因組DNA雙鏈或單鏈斷裂時(shí)會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的催化作用下，與YF® -dUTP結(jié)合，從而通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀直接進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（Terminal - deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。Tunel法可以對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可檢測出極少量的凋亡細(xì)胞，因而在細(xì)胞凋亡的研究中廣泛采用。
本試劑盒應(yīng)用范圍廣，可用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。可選擇性的檢測凋亡細(xì)胞，而非壞死細(xì)胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細(xì)胞。本試劑盒檢測細(xì)胞凋亡，耗時(shí)短，只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可檢測。
注意事項(xiàng)
1. 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品瞬時(shí)離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2. 染色背景較重或非特異性著色明顯時(shí)可適當(dāng)減少染色時(shí)間。
3. 實(shí)驗(yàn)時(shí)建議增加陰性對(duì)照和陽性對(duì)照組。
4. 組分A使用時(shí)請(qǐng)佩戴口罩、手套，如接觸皮膚，請(qǐng)立即用大量水沖洗。
5. 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
6. 本產(chǎn)品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
7. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見問題解答：
◆為什么出現(xiàn)了一些非特異標(biāo)記？
1. 有些細(xì)胞，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平較高，使得DNA全部被切斷，易導(dǎo)致假陽性。建議:取出細(xì)胞后要立即固定并充分固定，以阻止這些酶的活性，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照.
2. 固定液濃度過高或過低，導(dǎo)致中心部分細(xì)胞固定效果不佳，而使得中心部細(xì)胞自溶、DNA鏈出現(xiàn)不規(guī)則斷裂，產(chǎn)生假陽性。建議:推薦使用4%多聚甲醛。
3. TdT 酶反應(yīng)時(shí)間過長或Tunel反應(yīng)過程中反應(yīng)液發(fā)生蒸發(fā)或滲漏，細(xì)胞表面不能保持濕潤。注意控制反應(yīng)時(shí)間，并確保TdT 酶反應(yīng)液能很好地覆蓋樣品。
4. 有些試劑或細(xì)胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時(shí)要避開自發(fā)熒光的顏色。
◆為什么沒有染上熒光？
1. 固定不充分。固定液首選4%多聚甲醛，現(xiàn)用現(xiàn)配。不建議使用乙醇，乙醇固定液的滲透力較弱，影響TUNEL標(biāo)記效率。
2. 細(xì)胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到達(dá)核內(nèi)。細(xì)胞可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，不同的細(xì)胞所需要的通透時(shí)間略有不同，適當(dāng)調(diào)整。
3. 延長標(biāo)記時(shí)間至2h，并適當(dāng)增加TdT酶及dUTP的用量。
4. 確定實(shí)驗(yàn)對(duì)象細(xì)胞有凋亡。準(zhǔn)備一份DNase I處理的陽性對(duì)照，驗(yàn)證TdT酶反應(yīng)是否正確進(jìn)行。
◆如何對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染？
可在TUNEL反應(yīng)結(jié)束后對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。
◆為什么熒光背景高？
1. 支原體污染：可以使用支原體染色檢測試劑盒驗(yàn)證。
2. TdT 酶反應(yīng)時(shí)間過長，可以用試劑盒提供的TdT酶稀釋液將TdT酶稀釋2-5倍后再按照說明書操作，稀釋后的TdT酶僅供當(dāng)日使用。
3. 處于高速分裂和增殖狀態(tài)中的細(xì)胞，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞核中的DNA 斷裂。建議：在非高增殖期取樣檢測；
4. 有些試劑或細(xì)胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時(shí)要避開自發(fā)熒光的顏色。
5. DAB 孵育時(shí)間過長，減少DAB 染色時(shí)間。
6. Biotin-X-dUTP 的非特異性結(jié)合，在TdT 酶反應(yīng)之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。
◆標(biāo)記率低？
1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上購買的甲醛大多含有甲醇）固定的樣品標(biāo)記效率較低（因?yàn)樵诠潭〞r(shí)染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失），采用推薦的固定液。
2. 固定時(shí)間過長，導(dǎo)致交聯(lián)程度過高，減少固定時(shí)間。
3. 貼壁細(xì)胞如果使用藥物誘導(dǎo)凋亡，會(huì)細(xì)胞皺縮，貼壁黏附力降低，導(dǎo)致凋亡細(xì)胞容易脫落。建議：在凋亡誘導(dǎo)結(jié)束后，可以對(duì)多孔板進(jìn)行1000g離心5min，然后再吸出培養(yǎng)基并用PBS洗滌。如果沒有適合的離心機(jī)，請(qǐng)注意操作輕緩，防止發(fā)生凋亡的細(xì)胞在洗滌時(shí)被洗去。后續(xù)整個(gè)操作也需要輕緩。
使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
1.VEGF-C/VEGFR-3 axis protects against pressure-overload induced cardiac dysfunction through regulation of lymphangiogenesis
Qiu-Yue Lin, Yun-Long Zhang, Jie Bai, Jin-Qiu Liu, Hui-Hua Li
Clin Transl Med
2.Naringin interferes doxorubicin-induced myocardial injury by promoting the expression of ECHS1
Zirui Zhao，Shilei Yang，Yawen Deng，Liang Wang，Yifen Zhang，Zhenyu Feng，Han Li，Zhongchao Chi，Yunpeng Xie and Deshi Dong
Frontiers in Pharmacology
參考文獻(xiàn)
1.Apoptosis caused by Hsp90 inhibitor geldanamycin in Leishmania donovani during promastigote-to-amastigote transformation stage應(yīng)用方向：細(xì)胞凋亡染色&流式分析
2.OGG1-initiated base excision repair exacerbates oxidative stress-induced parthanatos
Ruoxi Wang, Chunshuang Li, Ping Qiao, Yaoyao XUE, Xu Zheng, Hongyu Chen, Xianlu Zeng,Wenguang Liu, Istvan Boldogh, XUEqing Ba
Cell Death&Disease(2018)
應(yīng)用方向：流式分析
Fengyan Zhang,Weihao Song,Ruiyan Yang, ..., Jie Qi, Quanqi Zhang,Yan He
應(yīng)用方向：使用TUNEL測定法分析了不同發(fā)育階段正常發(fā)育的交配（MG）和停滯發(fā)育的非交配（NMG）卵巢中的卵巢卵泡凋亡
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