產品概述：
儲存條件：-20℃避光冷藏，其中B組份也可4℃保存。為避免反復凍融，A與C組份建議分裝。有效期見外包裝。
產品組分
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組分 |
J6004S (20T) |
J6004L (100T) |
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A: JC-1, 100× in DMSO |
100 μL |
500 μL |
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B: 10× Assay Bu?er |
5 mL |
25 mL |
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C: CCCP, 50 mM |
10 μL |
50 μL |
產品介紹
線粒體膜電位降低是細胞早期凋亡的一個標志，它發生在細胞膜上的磷酯酰絲氨酸外翻與Caspase水解酶激活之前。當線粒體膜通透性發生改變時，膜電位會降低。這種膜電位的改變是由于Bax二聚體的形成和 Bid, Bak, Bad的激活，從而誘導線粒體膜形成孔隙造成的。當這些促凋亡蛋白被激活時，線粒體同時也將細胞色素C釋放到細胞質中。
JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△ Ψm的理想熒光探針，它可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，產生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體，可以產生綠色熒光。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到膜電位的下降，同時也可以用JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。
JC-1單體的最大激發波長為510 nm，最大發射波長為527 nm；JC-1 聚合物的最大激發波長為585 nm，最大發射波長為590 nm。本試劑盒操作簡單快速，可以通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀進行檢測，同時提供了CCCP作為誘導線粒體膜電位下降的陽性對照。
注意事項
1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。
2. JC-1(100× in DMSO)在較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
3. 配制JC-1染色工作液時，必須先把試劑盒提供的JC-1(100× in DMSO)用滅菌diH2O充分溶解混勻后，才可以加入10× Assay Buffer。不可先配制1× Assay Buffer再加入JC-1(100× in DMSO)，這樣JC-1會很難充分溶解，會嚴重影響后續的檢測。
4. JC-1染色完成后用1× Assay Buffer洗滌時，使1× Assay Buffer保持4℃左右，此時的洗滌效果較好。
5. JC-1染色并洗滌完成后盡量在30分鐘內完成后續檢測。在檢測前需冰浴保存。
6. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
7. 本產品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題解答：
◆在測線粒體膜電位時，未處理的細胞也會發出熒光，而且在試驗樣品中為什么沒有看到顯著差異？
無論您使用哪種染料，四甲基羅丹明甲酯（TMRM）還是MitoTracker Red FM，未處理的細胞都會發出熒光。只要細胞線粒體膜電位降低就會導致熒光信號降低，最重要的是變化的程度。當線粒體膜電位發生改變時，JC-1染料不僅強度改變，還有激發和發射比例光譜的改變。設置未處理的對照和用線粒體膜電位去穩定劑（如CCCP或FCCP）處理的陽性對照是非常重要的。這些染料僅用于活細胞，在固定處理的細胞中無法保留相同程度的信號。
◆用PFA固定是否可行（現場成像后，用于儲存）？或者這會干擾染料信號嗎？
如果您想保持JC-1染料和固定后檢測到的線粒體膜電位之間的關系，這是不可能的，這是因為JC-1依賴于線粒體膜電位，而線粒體膜電位將被固定所消除。
◆請問做JC-1培養板該如何選擇？比如用酶標儀檢測吸光度的話是否一定需要在避光培養板中做？普通的透明板可以嗎？如果用熒光顯微鏡觀察拍照的話又應該用什么板呢？
熒光酶標儀檢測的話要選用黑色的酶標板，熒光顯微鏡拍照的話可以用透明的板子
◆請問，對于從動物組織中用線粒體提取試劑盒提取出來的線粒體，用CCCP設置陽性對照組時，應該用什么濃度處理多長時間，不同組織中提純出來的線粒體，處理方式是否不同？
純化的線粒體不適合用于CCCP做陽性對照
◆可以用來組織切片染色嗎，如果可以需要注意什么呢？適用于組織的流式檢測嗎?
需要新鮮組織，先提取純化線粒體再檢測,可能不太適合做流式
◆請問CCCP對細胞膜電位的抑制作用可以有多長，我想測試長時間的48h？之后再染JC-1，有什么建議嗎？
對于大多數細胞，通常10μM CCCP處理20分鐘后線粒體的膜電位會完全喪失，JC-1染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料確定
◆你好，請問染完色后，用抗淬滅劑封片后免疫熒光顯微鏡觀察，鏡下觀察細胞會移動，拍出來的照片是模糊的，請問出現這種情況一般考慮什么問題？怎么解決呢？
可能是細胞沒固定的原因，一般可以在孔板里染色后直接用倒置顯微鏡在孔板里觀察，不用封片
◆請問用純化的線粒體比直接用細胞測流式有什么優勢嗎？是孵育的時間比較短嗎？直接用細胞做的，趨勢不明顯，如果提取線粒體后去測會不會得到更明顯的結果？
提取的純化線粒體是細胞器一般建議用熒光酶標儀檢測相應的紅綠熒光值，純化的線粒體染色更好染一些，相對于細胞來說可能會更好檢測一些
使用本產品的文獻：
1.Alpiniae oxyphyllae fructus possesses neuroprotective effects on H2O2 stimulated PC12 cells via regulation of the PI3K/Akt signaling Pathway
Ruolan Li, Lingyu Wang, Qing Zhang, Huxinyue Duan, Die Qian, Fei Yang, Jun Xia
Frontiers in Pharmacology
2.Pathologically high intraocular pressure induces mitochondrial dysfunction through Drp1 and leads to retinal ganglion cell PANoptosis in glaucoma
Zhou Zeng , Mengling You , Cong Fan , Rong Rong , Haibo Li , Xiaobo Xia
Redox biology
Shikang Zhou,Ziqi Wang,Ting Wang,Chunhua Peng,Jinyun Zhang,Chanming Liu,Jianda Xu,Yi Zhang,Li Zhang,Libo Luo,Xiaojing Yan
Ruifeng Luo, Jinwei Liu, Qian Cheng, Mitsuhiko Shionoya, Cheng Gao, Ruibing Wang
5.https://www.sciopen.com/article/10.26599/FSHW.2024.9250214
Ruo-Lan Li, Wen-Wen Chen, Hong Zhang, Qi Liang, Ling-Yu Wang, Wei Peng, Chun-Jie Wu
參考文獻
1.Mitochondrial membrane potential and nuclear changes in apoptosis caused by serum and nerve growth factor withdrawal: time course and modification by (-)-deprenyl
應用方向：熒光相對比率
2.Hsp60 regulation of tumor cell apoptosis
應用方向：細胞流式
3.Quantum dot-induced cell death involves Fas upregulation and lipid peroxidation in human neuroblastoma cells
應用方向：細胞成像
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