產品概述：
產品規格
20T，100T，1000T
儲存條件
-20℃保存，有效期見外包裝
應用范圍
真核基因表達調控研究
產品特點
1. 快速：細胞裂解在10-15 min內完成。
2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。
3. 靈敏：能夠檢測最低10-20 mol的螢光素酶。
4. 酶的濃度線性范圍可達8個數量級。
產品組分
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規格 組分 |
F6075S（20T） |
F6075M（100T） |
F6075L（10×100T） |
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A. 5× Passive Luciferase Lysis Buffer |
2 × 1 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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B. Firefly Luciferase Assay Buffer |
2 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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C. D-Luciferin |
0.4 mg |
2 mg |
10 × 2 mg |
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D. Renilla Luciferase Assay Buffer |
2 × 1 mL |
10 mL |
10 × 10 mL |
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E. 50× Coelenterazine |
40 μL |
200 μL |
10 × 200 μL |
產品介紹
真核基因表達調控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發光法又是報告基因檢測最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉化，并發射出光子。該產品為螢火蟲螢光素酶報告基因在哺乳動物細胞中的表達提供快速、靈敏、穩定的檢測方法。能夠檢測最低10-20 mol的螢光素酶，在10-14至10-20 mol的酶濃度范圍內呈很好的線性關系。
注意事項
1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。
2. 為取得最佳測定效果，在用單管的化學發光儀測定時，樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應盡量控制一致；使用具
有化學發光測定功能的多功能熒光酶標儀時，宜先把樣品全部加好，然后統一加入螢火蟲螢光素酶檢測試劑。
3. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發光的最強波長為560 nm，海腎螢光素酶催化的生物發光的最強波長為480 nm。
4. 為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。
5. 由于溫度對酶反應有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。
6. 為了你的健康和安全，操作過程中務必穿戴實驗服和一次性手套。
常見問題解答：
◆雙螢光素酶報告基因最適反應溫度？
室溫（20-22℃）。反應時各個組分（細胞裂解產物，底物工作液等）都需要調整到室溫。此兩種螢光素酶的反應速率是受溫度影響的，為了保證實驗的一致性，我們推薦此兩種工作液在檢測時都孵育至室溫。
◆雙螢光素酶報告基因載體該如何選擇？
（1）螢火蟲報告基因質粒原則上含有luc基因就可以，但是不同實驗所需的載體有一定差異，如果您要自己構建載體，要注意有些載體沒有啟動子，需要自行插入啟動子，如pGL3 Basic。
（2）海腎報告基因質粒盡量選擇中等強度的啟動子，如TK啟動子等，不要選擇強啟動子CMV、SV40等。海腎基因的表達活性應顯著高于背景組，同時不干擾螢火蟲螢光素酶報告基因的表達。。
◆檢測的螢光數值很低怎么辦？
（1）可能為轉染效率低
a.優化轉染實驗條件，用較易轉染的質粒做陽性對照（如轉染過表達熒光蛋白質粒）；
b.確保轉染DNA的質量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質量進行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數分裂期的細胞進行轉染。
（2）可能為啟動子活性低或誘導失敗
a.轉染后的細胞培養使用特異性誘導啟動子的條件；
b.優化細胞的培養條件，提高螢光素酶的表達量；
c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。
注：海腎螢光素酶基因作為內對照，其表達應不受時期、部位、環境影響，因此常用組成型表達的TK啟動子。
（3）樣品裂解效率低
a.細胞培養時間不宜過長，12-36h內最好，長時間培養后，細胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細胞能夠充分裂解。
（4）檢測過程操作不規范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學發光或者生物發光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結果出現很大偏差；
c.室溫反應。反應時各個組分（細胞裂解產物，底物工作液等）都需要調整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內完成。
（5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應工作液建議現用現配。
使用本產品的文獻：
Xiaofeng Zhou, Ziyi Yan1, Jinghan Hou, Lichen Zhang , Zhen Chen, Can Gao, Nor Hazwani Ahmad ,Mingzhou Guo, Weilong Wang, Tao Han , Tingmin Chang, Xiaohong Kang , Lidong Wang , Yinming Liang and Xiumin Li
應用方向：基因轉錄調控檢測
Changsen Bai, Chaomin Wang, Jialei Hua, Na Zhao, Tong Li, Wenxin Li, Wenhao Niu, Benfu Zhong, Shuaini Yang, Chunda Chen, Gang Zhao, Li Qiu, Zhansheng Jiang, Lifang Li , Yueguo Li, Hailong Wang
Jiayang Li (李佳陽) , Jiejie Ren (任潔潔) , Xingyu Lei (類興宇) , Wenmin Fan (樊文敏) , Lei Tang (唐磊) , Qiqi Zhang (張琦琦) , Zhulatai Bao (包珠拉太) , Wenfei Zhou (周文菲) , Juan Bai (白娟) , Yuzhou Zhang (張余周) , Chunmei Gong (龔春梅)
Yuxiang Liu, Jiangbo Qu, Rui Li, Jie Qi, Quanqi Zhang
5.Identiffcation of different myoffber types in pigs muscles and construction of regulatory networks
Chenchen Li, Yinuo Wang, Xiaohui Sun, Jinjin Yang, Yingchun Ren, Jinrui Jia, Gongshe Yang, Mingzhi Liao, Jianjun Jin, Xin'e Shi
6.Upregulation of coagulation factor V by glucocorticoid in the preovulatory follicles of zebrafish
Jing Huang a, Chao Sun a, Zhuo Huang a, Yong Zhu a b, Shi Xi Chen
Haigang Cao, Chenchen Li, Xiaohui Sun, Jinjin Yang, Xiao Li, Gongshe Yang, Jianjun Jin, Xine Shi
Changan Zhu, Zhangjian Hu, Chaoyi Hu, Hongxue Ma, Jie Zhou, Xiaojian Xia, Kai Shi, Christine H Foyer, Jingquan Yu, Yanhong Zhou
Jiayang Li, Jiejie Ren, Qiqi Zhang, Xingyu Lei, Zongqi Feng, Lei Tang, Juan Bai, Chunmei Gong
參考文獻
1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.應用方向：基因轉錄調控檢測
2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.
應用方向：基因轉錄調控檢測
3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.
應用方向：基因轉錄調控檢測
4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.
應用方向：基因轉錄調控檢測
應用方向：基因轉錄調控檢測
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