儲存條件

4℃避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝。

光譜特性

Annexin V-PE：Ex/Em = 488/578 nm

產(chǎn)品介紹

Annexin V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36 KD的Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與磷脂酰絲氨酸(PS)選擇性結(jié)合。磷脂酰絲氨酸（PS）主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。此時，使用熒光蛋白PE標(biāo)記的Annexin V即Annexin V-PE,與外翻的磷脂酰絲氨酸（PS）結(jié)合，就可用流式細(xì)胞儀直接檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。正常細(xì)胞不會被Annexin V-PE所染色，發(fā)生凋亡或壞死的細(xì)胞會被Annexin V-PE所染色。Annexin V-PE可以與部分非滲透性的細(xì)胞核染料（7-AAD/PI）聯(lián)合使用，區(qū)分處于不同凋亡時期的細(xì)胞。

注意事項(xiàng)

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2. 為降低細(xì)胞凋亡進(jìn)程，孵育過程可在冰上操作，但孵育時間至少延長至30 min。

3. 由于細(xì)胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1 h之內(nèi)進(jìn)行分析。

4. 對于貼壁細(xì)胞，消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時如有漂浮細(xì)胞，需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。胰酶消化時間過短，細(xì)胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細(xì)胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時間過長，細(xì)胞膜同樣易造成損傷，甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-PE的結(jié)合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰酶與細(xì)胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細(xì)胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結(jié)合。

5. 貼壁細(xì)胞用胰蛋白酶消化后，建議在最佳培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基中恢復(fù)約30 min后染色，避免假陽性。

6. 為了避免洗滌細(xì)胞時損失細(xì)胞，在吸液時可以用大的Tip頭套上小的Tip頭吸液。

7. 染料的最佳使用濃度由具體實(shí)驗(yàn)要求確定。

8. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

9. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。