儲存條件

-20℃保存，有效期見外包裝

應用范圍

真核基因表達調控研究

產品特點

1. 快速：細胞裂解在10-15 min內完成。

2. 方便：試劑易于配制，樣品檢測步驟簡單。

3. 靈敏：能夠檢測最低10^-20 mol的螢光素酶。

4. 酶的濃度線性范圍可達8個數量級。

產品組分

產品介紹

真核基因表達調控研究常用的方法是進行報告基因的檢測，生物發光法又是報告基因檢測最常用的有效手段。螢光素酶能催化底物螢光素的轉化，并發射出光子。該產品為螢火蟲螢光素酶報告基因在哺乳動物細胞中的表達提供快速、靈敏、穩定的檢測方法。能夠檢測最低10-20 mol的螢光素酶，在10-14至10-20 mol的酶濃度范圍內呈很好的線性關系。

注意事項

1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。

2. 溫度會對酶的活性產生影響，因此所有試劑應放置室溫后再使用。

3. 如果單管螢光測定儀測定，每個樣品與測定試劑混合后到測定前的時間應保持一致。

4. 螢火蟲螢光素酶催化的生物發光的最強波長為560 nm。

5. 為防止孔間干擾，建議使用白色不透光孔板。

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

(1）可能為轉染效率低
a.優化轉染實驗條件，用較易轉染的質粒做陽性對照（如轉染過表達熒光蛋白質粒）；
b.確保轉染DNA的質量，可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質量進行鑒定；
c.選擇活性較高，處于指數分裂期的細胞進行轉染。
(2）可能為啟動子活性低或誘導失敗
a.轉染后的細胞培養使用特異性誘導啟動子的條件；
b.優化細胞的培養條件，提高螢光素酶的表達量；
c.更換強啟動子（如SV40、CMV）。
注：海腎螢光素酶基因作為內對照，其表達應不受時期、部位、環境影響，因此常用組成型表達的TK啟動子。
(3）樣品裂解效率低
a.細胞培養時間不宜過長，12-36h內最好，長時間培養后，細胞可能會難裂解。
b.加入的裂解液需足量，保證細胞能夠充分裂解。
(4）檢測過程操作不規范
a.選擇合適的檢測儀器，能夠檢測化學發光或者生物發光的儀器都適用于該實驗；
b.需加入足量底物，保證底物的飽和，否則會造成檢測結果出現很大偏差；
c.室溫反應。反應時各個組分（細胞裂解產物，底物工作液等）都需要調整到室溫；
d.螢光素酶的半衰期一般約30min，加完底物后可立即檢測，盡量在30min內完成。
(5）底物氧化失效
a.底物避光密封保存，螢火蟲熒光素酶底物-20℃保存；海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存；
b.反應工作液建議現用現配。

◆進行檢測的過程中，螢光信號值太高該如何進行調整？
（1） 減少質粒轉染量。
（2）細胞樣品裂解后，離心取上清后檢測或對裂解產物進行稀釋后檢測。
注：不建議通過減少底物量來降低熒光值，需要保證底物的飽和來反映螢光素酶真實的表達水平，否則會造成檢測結果出現大的偏差。