產品概述：
產品參數
外觀：可溶于DMSO 的灰白色固體
CAS號：148504-34-1
Ex/Em：494/517 nm (pH =8)
分子式：C46H46N2O23
分子量：994.9
分子結構圖：
儲存條件
-20℃ 避光保存，有效期見外包裝。
產品介紹
Calcein AM 是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，它可以穿透細胞膜進入細胞，被細胞內的酯酶剪切形成 Calcein，從而被滯留在細胞內，發出強綠色熒光。與其它同類試劑（如 BCECF, AM 和 CFDA）相比，Calcein AM 的細胞毒性很低。Calcein 的激發和發射波長分別為 490 nm 和 515 nm。Calcein AM 僅對活細胞染色。可與 PI 聯用，用于區別活細胞和死細胞。由于不同細胞系的最佳染色條件不同，我們建議根據實際情況確定 Calcein AM 的最適濃度。
注意事項
1. Calcein AM 的酯鍵遇到濕氣會分解，使用后請在 -20℃ 下密閉冷凍保存，防止水分進入。
2. Calcein AM 儲備液稀釋后請及時使用，盡量現配現用。
常見問題解答：
◆細胞追蹤有很多產品，該如何選擇？
首先確定追蹤細胞的時間，然后考慮染料結合機制。
1.鈣黃綠素染料（C4041）標記均勻且對短期細胞遷移示蹤效果極佳，但也會被某些類型細胞迅速外排。
2.親脂性的花青素染料，如DiI（D4010），DIO（D4007），DiA(D4059)，DiD(D4019)，DiR(D4006)能標記細胞膜而不破壞其功能，并且能持續更長時間，但如果發生膜融合則可能會染上其他細胞。此外，它們還會在透化過程中丟失。
3.CellTracker染料（C4060）更有利于長期標記，其帶有溫和的氯甲基反應基團使之能夠與細胞組分共價結合。
4.CFDA SE（C4070）也能共價地結合于細胞組分。
在所有列出的試劑中，細胞內保留與否取決于細胞分裂的速率和細胞的固有特性（主動外排，膜和蛋白質的周轉率等）。其中共價結合試劑比非共價結合的試劑展現出更長的保留時間
◆用Calcein，AM標記了細胞，但是第二天成像時，沒有來自Calcein的熒光，為什么？
Calcein，AM是細胞追蹤和普通細胞質染色的良好選擇，然而，它不與任何東西結合，可能會在幾個小時內被主動抽出細胞，鈣黃綠素在活細胞內的保留取決于細胞類型和培養條件的固有特性
對于長期成像，您可能希望考慮反應性細胞質染色，如CFDA，SE染料
◆我想在活細胞中加入一種染料，使其在高濃度下自猝滅，但如果細胞死亡，染料將被釋放并取消猝滅。有這樣的嗎？
可以的，這通常是通過鈣黃綠素AM或FDA（熒光素二乙酸酯）完成的。這些染料在被酯酶分解之前不會發出熒光。經酯酶修飾后，在非常高的濃度下，它們會自我猝滅。一旦質膜破裂或細胞死亡，染料將被釋放到細胞外介質中，并變得不猝滅。必須優化濃度和培養時間，以獲得足夠的淬火效果
◆當我用鈣黃綠素 AM對細胞進行染色時，細胞經過固定處理后信號就消失了，為什么？
Calcein AM擴散到細胞中，“AM”部分由細胞酯酶裂解，隨后染料分子的熒光信號可以在細胞質中被觀測到，但其不結合到細胞組分。這意味著它們能夠為“整個細胞”染色。這也意味著染料不能通過醛類固定劑進行交聯，因此染料會在固定時丟失。此外，質膜的任何干擾（例如去垢劑或胰蛋白酶處理）都會導致染料從細胞中滲漏。
◆想做一個細胞遷移研究大約4個小時，需要用染料熒光標記細胞，您有什么推薦的嗎？
Calcein AM和FDA（熒光素二乙酸鹽）是用于該應用的一些染料的實例，由于這些染料不與任何細胞組分結合或共價連接，它們可能具有短的保留時間，因為一些細胞類型可能主動將染料從細胞中流出
使用本產品的文獻：
引用文獻
1.Methods for the assessment of mitochondrial membrane permeabilization in apoptosis
應用方向：活細胞染色
2.A fluorometric assay for the quantitation of cell adherence to endothelial cells
應用方向：細胞增殖和功能
3.Localization and activity of multidrug resistance protein 1 in the secretory pathway of Leishmania parasites
應用方向：細胞示蹤
4.Viability assessment of turkey sperm using fluorescent staining and flow cytometry
應用方向：細胞流式
5.Visualization of keratocytes in the human cornea with fluorescence microscopy
應用方向：組織切片染色
6.An accurate, precise method for general labeling of extracellular vesicles
應用方向：外泌體完整性檢測。如果外泌體完整性很好，綠色熒光就可以保留在外泌體中，反之，則會從外泌體中泄漏出來
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