產品介紹

Cell Counting Kit-8簡稱CCK8（或WST-8）試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）顯色反應的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

WST-8是MTT的一種升級替代產品，和MTT或MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8、XTT和MTS產生的甲臜都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟，WST-8產生的甲臜比XTT和MTS產生的甲臜更易溶解，WST-8比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定，WST-8與MTT、XTT相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

WST-8在電子耦合試劑存在的條件下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450 nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。工作原理見圖1。

圖1 CCK-8原理示意圖

應用范圍

藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測

產品貨號

C6005S/C6005M/C6005L/C6005XL

儲運條件

4℃避光保存，長期儲存置于-20℃，有效期見外包裝；冰袋運輸。

產品組別

產品特點

線性好：我司產品在高細胞數量下和低細胞數量下都具有良好的線性；

毒性低：本產品對細胞造成很低的毒性，不會影響后續實驗；

即用型：本產品開蓋即用，無需做梯度稀釋。

注意事項

1. 使用前請將產品瞬時離心至管底，再進行后續實驗。

2. 使用96孔進行細胞鋪板，如果培養時間較長，一定要注意蒸發問題。建議采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS水或者培養液。

3. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。

4. 若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCl溶液或者1% w/v SDS溶液，并將培養板在室溫條件下避光保存。24 h內測定，吸光度不會發生變化。

5. 若細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化或pH發生變化，建議更換新鮮的培養基后再加CCK-8試劑。含有酚紅的培養基不影響本試劑盒做細胞活性的測定。

6. 如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議設定600 nm（或600 nm以上）作為參比波長，扣除參比波長的OD值即可。

7. CCK-8試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深，OD值不斷增加（注：活細胞內的脫氫酶是持續產生的），一般推薦的孵育時間是0.5~4 h。

8. 本產品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1.細胞數量過低，建議增加細胞待測數量；
2.染色難度大，建議增加CCK-8孵育時間

◆數據重復性差？
1.孔板最外圈試劑容易揮發，建議最外一圈的孔只加培養基，不作為測定孔用；
2.CCK-8沾壁，建議加入CCK-8后，輕輕敲擊培養板以幫助混勻；
3.細胞數量過多或過少，建議預先在1000-100000個/孔范圍內摸索條件；
4.孔內氣泡干擾酶標儀檢測，檢測前需確保每個孔內無氣泡

◆在做細胞的加藥實驗時,藥物對CCK-8測定是否有影響?
1.注意如果藥物具有還原性(如維生素C),會和CCK-8發生顯色反應,增加吸光度；
2.藥物中的金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%, 90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。解決辦法:首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養基,去掉藥物的影響；
3.由于培養基中可能含有氧化還原反應的物質,在正式實驗之前,建議使用一個孔作一下檢測,有必要先確認培養基和CCK-8是否反應，一般正常的OD值應該在0.4以下

◆可否采用CCK-8法進行藥物的IC50檢測？
可以,將細胞培養后按照不同濃度的藥物處理一定時間后進行CCK-8檢測,根據吸光度繪制曲線,計算該藥物抑制細胞數量一半時的濃度(IC50)

◆CCK-8對于不同的細胞,靈敏度是否一樣？
不一樣,懸浮細胞較貼壁細胞難染色。對于貼壁細胞,一般加入CCK-8培養1-4小時吸光度已經很高,但對于懸浮細胞則可能吸光度較低,可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決

◆若是暫不檢測OD值，該如何處理?
若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24 小時內測定，吸光度不會發生變化

◆用CCK-8測細胞活力時每次都要做標準曲線嗎？
建議每次做，雖然細胞是一樣的，但是細胞的狀態不一定一樣。對于狀態不一樣的細胞，建議每次做標準曲線

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